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相差、暗视野和荧光偏光显微镜的示范观察

发布人:shpuda发布时间:2014/4/23

    一、实验器材


    1.菌种


    大肠杆菌和酿酒酵母的培养斜面。


    2.溶液和试剂


    无菌水,香柏油,二甲苯,吖啶橙和蒸馏水等。


    3.仪器和其他用品


    相差偏光显微镜,暗视野聚光器,荧光显微镜,合轴调节望远镜,滤光片,载玻片和盖玻片等。


    二、目的要求


    1.了解相差、暗视野及荧光显微镜的工作原理。


    2.学习并掌握使用上述3种偏光显微镜观察微生物祥品的基本方法。


    三、基本原理


    使用普通明视野显微镜进行微生物样品的观察时通常需要对样品进行染色处理,以提高反差。这是因为明视野偏光显微镜的照明光线直接进人视野,属透射照明,透明的活菌在明视野中会由于和明亮的背景间反差过小而不易看清细节。本实验先容的相差、暗视野及荧光显微镜,都是通过在成像原理上的改进,提高了显徽观察时样品的反差,可以实现对微生物活细胞的在接观察。


    (一)相差显微镜


    在明视野下看起来透明的样品如活细菌细胞,其不同部分的密度和折射率实际上是有差异的。光线通过这些样品时,光波的相位因此发生变化.但这种相位变化不表现为明暗和颜色上的差异,不能为人眼所悠知。相差偏光显微镜到能通过其特殊装置—环状光阑和相板,将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差(明暗差)。如果产生的干涉为相长干涉,则振幅的同相胶相加而变大(图Ⅲ-9A),该部分样品的亮度加大;如果所产生的干涉为相消干涉(图Ⅲ-9B),则振福的异相量相消而变小,这部分就变得较暗。这样.变相位差为振幅差的结果,使原来透明的样品会由于其内部不同组分间光干涉现象的差异表现为明显的明暗差异,对比度增加,能更加清晰地观察到在普通光学偏光显微镜中看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构。

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